Siembra de cultivos
Sesión
3
Práctica 5
Sabiendo ya la composición, tipos y como debemos
preparar los cultivos que hemos aprendido en el anterior post, ahora vamos a
ver como se deben hacer las siembras de estos cultivos, para ello vamos a ver cuáles
son los métodos usados. Ya queda menos para poder hacer recuento de
microorganismos ¡A por la bata!
Objetivos
Aprender a sembrar cultivos para su posterior recuento
Fundamento
Sembrar o inocular en un medio artificial una porción
de muestra es lo fundamental para que finalmente podamos incubar dicho medio a
cierta temperatura y que después podamos hacer un recuento, que es la finalidad
de todo este proceso
Procedimiento
Para sembrar tenemos diversos métodos por lo que
explicaré cada uno de los que conozco de forma ordenada para que no se lie
nadie:
En general para coger el cultivo:
1.Ponemos un mechero bunsen cerca de la mesa de
trabajo donde vamos a hacer la siembra, esto nos dará condiciones de
esterilidad necesarias para este proceso
2.Flameamos el asa que vayamos a usar en cada caso
(asa Digralsky, siembra, hisopo…) según el asa deberemos llevarla al rojo vivo
o ponerla antes en alcohol para solo flamear un momento
3.Cogiendo con la mano no dominante el recipiente de
la muestra procedemos a:
-En placa: Manteniéndola invertida se levanta cara la
llama, se toma una porción de la colonia que queramos sembrar y se cierra la
placa.
-En tubo: se sujeta el tapón con el meñique de la mano
dominante y se flamea la boca del tubo para esterilizarlo, seguidamente se
sumerge el asa y se remueve para coger las colonias, volvemos a flamear la boca
del tuvo y cerramos
4.Sembramos según las técnicas que veremos a
continuación
5.Volvemos a esterilizar el asa una vez terminado
Este proceso es para coger el cultivo que deseamos
sembrar en una placa deseada, pero ahora para sembrarlo se utilizan diversos
métodos
Siembra según tipo de medio
-En medio líquido sumergimos el asa y agitamos para
que se desprenda el inóculo (colonia a sembrar)
-En medio semisólido vamos a usar una picadura
hundiendo el asa y retirando posteriormente en el mismo trayecto.
-En tubo con medio sólido podemos hacerlo de
diferentes formas: En tubo con agar horizontal que sería por picadura, en agar
inclinado o slant (pico de flauta) que se desliza el asa haciendo un zigzag
desde el fondo hacia la parte superior, aunque también se puede combinar
empezando con picadura y terminando con zigzag
-Cuando hablamos de siembra en placa, es decir, en
medio sólido, que con ella tendremos colonias de cada célula viable que
plantemos en este caso es más amplio porque hay diferentes métodos de siembra
que diré mejor a continuación
Siembra en placa
-Por siembra de agotamiento en estría para aislar,
tenemos dos formas: Estría simple con una sola línea en zigzag y con la siembra
lo más lejos del operador, y la estría múltiple que se descarga de 3-4 veces en
estrías, cada vez esterilizando el asa de siembra y dejando que se enfríe (se
puede pinchar el agar para favorecer el enfriamiento), en este caso es
importante que la primera estría se junte con la segunda solo dos veces, la
segunda con la tercera dos veces y la tercera con la cuarta solo una vez
-La siembra en superficie con césped o inundación, añadiendo
un volumen conocido por una pipeta estéril y removiendo con asa Digralsky,
según dilución se podrá luego contar más o menos (no es lo mismo una dilución
1/10 que 1/1000)
-Siembra incorporada, que es verter 1ml de agua de
muestra directamente en el centro de la placa y añadir 20 ml de medio de
cultivo fundido, se agita y nos sirve para recuento de UFC (unidades formadoras
de colonias)
Por último es importante decir que cuando vayamos a
usar el horno o estufa es importante que esté a la temperatura necesaria para
el cultivo que vayamos a usar, ya que no es lo mismo para mesófilos (35-37ºC)
que para termófilos (44ºC)
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