Recuento coliformes totales por filtración
Sesión
8
Práctica 10
Otro recuento como el anterior post, solo que en este
cambiaremos de medio por lo que cambiamos de microorganismos a los que
buscamos, ahora lo que nos interesa es encontrar coliformes totales, pero el
método será el mismo de filtración por kitasato ¡A por la bata!
Objetivos
Recontar coliformes totales en el medio agar ENDO
Hacer la siembra mediante filtración con kitasato
(100ml)
Interpretar resultados obtenidos
Fundamento
Realizar una filtración al vacío mediante un kitasato
para hacer pasar por un filtro de poro 0,45mm el agua y se retenga en el los
microorganismos que queremos sembrar en el medio de cultivo ENDO en el que
buscaremos coliformes totales
ENDO
Originalmente desarrollado para el aislamiento de
Salmonella typhi, pero ahora es usado mayormente como un medio para coliformes.
Mayoría de los organismos Gram negativos crecen bien en este medio, mientras
que otros organismos Gram positivos son inhibidos. Los organismos coliformes
fermentan la lactosa en este medio produciendo un color rojo (Escherichia coli)
mientas que los no fermentadores de lactosa producen colonias claras y sin
color, por ejemplo Salmonella sp.
Incubación: Incubar las placas en un lugar oscuro
durante un período de 18 a 24 horas a una temperatura de 35 ± 2 °C en un
ambiente aerobio
Composición:
-Peptona (Nutrientes para el desarrollo
de bacterias)
-Fosfato dipotásico (para conseguir
fosfatos)
-Lactosa (Hidratos de carbono para los
fermentadores)
-Sulfito de sodio (para determinar la
presencia de sulfureductores)
-Fucsina (inhibidor de gram +)
-Agar (Solidificante)
Útil para:
Materiales
Mechero
Vasos de precipitado (agua destilada estéril, agua
muestra, alcohol)
Embudo
Probeta 100 ml
Pipeta Pasteur
Matraz Kitasato
Alcohol
Agua Destilada Estéril
Placa Petri estéril
Pinzas
Mechero Bunsen
Filtro reticulado
Procedimiento
1. Preparamos el lugar de trabajo montando el matraz
kitasato con sus partes y el aparato de vacío. También encendemos el mechero
bunsen ya que necesitamos condiciones de esterilidad
2. Teniendo el agua muestra ya preparada, preparamos
en un vaso de precipitado alcohol para cuando tengamos que flamear las pinzas y
en la placa Petri estéril ponemos agua destilada estéril para dejar el filtro
que vamos a usar y que se despegue la parte sobrante
3. Para coger el filtro flameamos primero las pinzas
con cuidado, cogemos le filtro y lo pasamos a la placa Petri con el agua
estéril. Seguidamente cerramos la placa Petri hasta que se despegue bien el
trozo sobrante del filtro.
4. Volvemos a esterilizar las pinzas y cogemos el filtro
5. De forma rápida pero eficaz vamos a poner el filtro
encima del Kitasato y cerramos con el embudo para filtrar, ponemos las pinzas
de seguridad para que no se vaya a caer el embudo y hacer mejor la filtración.
6. Encendemos la bomba de vacío, el agua irá pasando
por el filtro, en este paso asegurarnos que todo el aparato de filtrado está bien
apretado sino la aspiración será escasa y tardará más
7. Al terminar retirar pinzas de sujeción, embudo y coger
el filtro con las pinzas (previamente esterilizadas flameándolas)
8. Se deja el filtro en la placa Petri del medio agar
ENDO con cuidado de no hacer burbujas entre el medio y el filtro
9. Rotular la placa con los datos necesarios sobre el
recuento que se está realizando, fecha y persona.
10. Por último guardar el cultivo boca abajo y a una
temperatura de 40ºC durante 18-24 horas
Medidas de prevención
Cuidado al flamear con que caiga algo del alcohol
sobre el papel filtrante sobre el que trabajamos
Cuando se manipule la muestra usar guantes para evitar
contagios, pero cuando se está con el fuego se debe quitar el guante con el que
se está manipulando ya que entorpece y puede llevar a errores
Resultados
Salieron menos de 30 colonias por lo que serían
incontables, aunque si es interesante decir que había presencia de E.Coli por
su color rosa oscuro y brillo verde metálico
No hay comentarios:
Publicar un comentario