Recuento aerobios mesófilos por filtración
Sesión
7
Práctica 9
Siguiente recuento, ya hemos probado como se hace un
recuento en placa y a la vez la siembra de césped en anteriores post. Ahora,
nos toca conocer nuevo agar, nuevo método de siembra y… ¡A por la bata!
Objetivos
Recontar los aerobios mésofilos presentes en el
cultivo PCA
Hacer la siembra mediante filtración con kitasato
Fundamento
Realizar una filtración al vacío mediante un kitasato
para hacer pasar por un filtro de poro 0,45mm el agua y se retenga en el los
microorganismos que queremos sembrar en el medio de cultivo PCA
PCA
El PCA(Plate Count Agar) no es un medio selectivo, es
un medio muy nutritivo, para que crezca todo. Para contar cuantas bacterias hay
en algo, lo vamos a usar para hacer un recuento de bacterias en el agua, para
encontrar todas las que haya.
Hay tantas bacterias por mililitro, cada colonia es
una bacteria.
Para el recuento de bacterias aeróbicas en aguas,
aguas residuales, productos lácteos y otros alimentos.
Composición:
-Extracto de levadura (comida para la
bacteria, fuente de carbono y fuente de nitrógeno)
-Tripteína (Peptona digerida con
caseína)
-Agar (Darle consistencia al medio)
-Glucosa (Hidratos de carbono simples)
Incubación: Durante 24-48 horas a 32-35 °C en
aerobios.
Útil para:
Está basada en el alto contenido nutricional de sus
componentes, que permite el desarrollo de las bacterias presentes en la muestra
Microorganismos // Crecimiento
Staphylococcus aureus ATCC 25923 // Bueno
Bacillus cereus ATCC 10876 // Bueno
Escherichia coli ATCC 25922// Bueno
Lactobacillus fermentum ATCC 9338 // Regular
Streptococcus
agalactiae ATCC 13813 // Bueno
Materiales
Mechero
Vasos de precipitado (agua destilada estéril, agua
muestra, alcohol)
Embudo
Probeta 100 ml
Pipeta Pasteur
Matraz Kitasato
Alcohol
Agua Destilada Estéril
Placa Petri estéril
Pinzas
Mechero Bunsen
Filtro reticulado
Procedimiento
1. Preparamos el lugar de trabajo montando el matraz
kitasato con sus partes y el aparato de vacío. También encendemos el mechero
bunsen ya que necesitamos condiciones de esterilidad
2. Teniendo el agua muestra ya preparada, preparamos
en un vaso de precipitado alcohol para cuando tengamos que flamear las pinzas y
en la placa Petri estéril ponemos agua destilada estéril para dejar el filtro
que vamos a usar y que se despegue la parte sobrante
3. Para coger el filtro flameamos primero las pinzas
con cuidado, cogemos le filtro y lo pasamos a la placa Petri con el agua
estéril. Seguidamente cerramos la placa Petri hasta que se despegue bien el
trozo sobrante del filtro.
4. Volvemos a esterilizar las pinzas y cogemos el filtro
5. De forma rápida pero eficaz vamos a poner el filtro
encima del Kitasato y cerramos con el embudo para filtrar, ponemos las pinzas
de seguridad para que no se vaya a caer el embudo y hacer mejor la filtración.
6. Encendemos la bomba de vacío, el agua irá pasando
por el filtro, en este paso asegurarnos que todo el aparato de filtrado está bien
apretado sino la aspiración será escasa y tardará más
7. Al terminar retirar pinzas de sujeción, embudo y coger
el filtro con las pinzas (previamente esterilizadas flameándolas)
8. Se deja el filtro en la placa Petri del medio PCA
con cuidado de no hacer burbujas entre el medio y el filtro
9. Rotular la placa con los datos necesarios sobre el
recuento que se está realizando, fecha y persona.
10. Por último guardar el cultivo boca abajo y a una
temperatura de 35-37ºC por ser mesófilos
Medidas de prevención
Cuidado al flamear con que caiga algo del alcohol
sobre el papel filtrante sobre el que trabajamos
Cuando se manipule la muestra usar guantes para evitar
contagios, pero cuando se está con el fuego se debe quitar el guante con el que
se está manipulando ya que entorpece y puede llevar a errores
Resultados
En este caso no hubo resultados, ya que las colonias
no se podían contar por encontrarse aglutinadas
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