Día 12 - Aprendemos a prepararnos los medios de cultivo

Preparación de cultivos

 

Sesión 3                    Práctica 4

Viramos totalmente de tipo de prácticas para adentrarnos en el mundo de los cultivos, en este caso vamos a crear medios para el cultivo de microorganismos, luego para su siembra y por último poder hacer un recuento o interpretación de estos. Primero lo primero, vamos a preparar los cultivos ¡A por la bata!

Objetivos

Aprender a preparar medios de cultivo

Saber su utilidad, composición, tipos de medio que podemos encontrar

Utilidad de los medios de cultivo

Un medio de cultivo nos sirve para separar y aislar microorganismos que tenemos en una muestra, para identificar un microorganismo problema, conocer el metabolismo de ese microorganismo.

Estudiar colonias en un medio (cantidad y tipos), realizar antibiogramas, pruebas de concentración mínima inhibitoria (CMI) y conservación de especies

Composición de un medio de cultivo

Tenemos nutrientes energéticos como las fuentes de carbono (glucosa, lactosa, almidón) o fuentes de nitrógeno que es menos energética pero necesaria (proteínas, peptonas, extractos de carne…)

Por otra parte tenemos los nutrientes no energéticos como el agua (Indispensable para no alterar equilibrio de sales), sales minerales para equilibrio osmótico y aportar micronutrientes (Sales de sodio, potasio, magnesio, hierro…), fuentes de azufre (sulfatos, tiosulfatos) y fuentes de fosforo en forma de fosfatos

Otros componentes que le podríamos añadir al medio de cultivo son agentes solidificantes (Agar, gelatina), tampones para estabilizar el pH, indicadores de pH (rojo neutro, azul de bromotimol, fenolftaleína), agentes reductores para ayudar a la anaerobiosis en el medio (tioglicolato sódico, ácido ascórbico, cisteína)

También ciertos factores de crecimiento como vitaminas, purinas o pirimidinas y en otros casos factores de inhibición para evitar el crecimiento de algún tipo de microorganismo (azida sódica para Gram -, Verde Brillante para Gram +, Sales biliares para organismos no entéricos, antibióticos…)

Tipos de medio de cultivo

Según su consistencia si son caldos (sin agar), sólidos (con agar 15-17 gr/L, gelatina o albúmina) o semisólidos (agar 3-5 gr/L)

Según su composición siendo definidos los que se conocen totalmente y complejos los que su composición química exacta no es conocida

Según su utilidad es para medios generales o comunes (para mayoría de microorganismos poco exigentes), enriquecidos (para más exigentes añadiendo sangre o glucosa), medios selectivos (con sustancias enriquecidas e inhibidoras para algún tipo de microorganismo)

Medios diferenciales (Con componentes que da información adicional por medio de reacciones bioquímicas como son los indicadores de pH, colorantes…) y medios de transporte y conservación (para asegurar la viabilidad de microbios desde muestra hasta el laboratorio)

Preparación de medios de cultivo

Aunque se pueden comprar directamente preparados vamos a tenerlos en cuenta comprados liofilizados que es cuando los prepararemos nosotros mismos. Es un  proceso sencillo:

1.Se pesa la cantidad deseada de medio que queremos hacer (normalmente en el bote pone cuantos gramos son por litro, con una regla de 3 se puede sacar la cantidad si es menos o más de un litro)

2.Disolver los gramos en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante

3. Se esteriliza el medio en autoclave excepto cuando en el bote te ponga que no se debe hacer como en Slanetz-Bartley

4. Una vez esterilizado se pondrá en un tubo (debe ser puesto antes de ser esterilizado en este y podrá ser en medio líquido o agar inclinado, en este caso se deja inclinado cuando se encuentra líquido para que solidifique en esa posición)  o en placa Petri (se esteriliza el medio en una botella o matraz Erlenmeyer y luego cuando se enfríe pero no demasiado para que no solidifique se pasa a placa, se hace en condiciones de esterilidad con un mechero bunsen y al final se almacena en posición invertida