Recuento enterococos fecales por filtración
Sesión
12
Práctica 14
Y vamos ya con la última práctica que hemos realizado
este año, ha si muy interesante aprender tantas cosas en laboratorio, el
pequeño Dexter que tengo en mi interior está orgulloso de haber aprendido a hacer
tantas cosas, y para terminar no podía ser de otra manera ¡Recuento! Vamos a
recontar enterococos fecales por lo que necesitaremos un medio Slanetz-Barley
para ello y 44ºC, pero no adelanto más cosas ¡A por la bata!
Objetivos
Recontar enterococos fecales en el medio agar
Slanetz-Bartley
Hacer la siembra mediante filtración con kitasato 100ml.
50 muestra/50 agua estéril
Interpretar resultados obtenidos
Fundamento
Slanetz-Barley
Medio muy selectivo indicado para aislamiento y
recuento de enterococos fecales en agua y en alimentos, con la técnica de
filtración de membrana o con el método de siembra en superficie. No crece E.
Coli
Incubación: Incubar a 36 ºC aproximadamente, 44 horas
(para mejor selectividad, a 44-45 ºC aproximadamente, preferiblemente tras 4h a
36°C aproximadamente). Contar todas las colonias rojo, marrón o rosa como
enterococos presuntiva. No todas las especies reducen TTC colonias, por lo
tanto pálidos no deben ser ignorados.
Composición:
-Triptona y Extracto de levadura (Nutrientes
energéticos para crecimiento MO)
-Glucosa (Hidratos de carbono para
bacterias fermentadoras)
-Fosfato dipotásico (Fostatos para
bacterias)
-Azida sódica (Inhibidora de Gram-)
TTC
Agar (Solidificante del medio)
Útil para:
E.coli
MKTA 25922
Inhibido.
Bacillus subtilisMKTA 6633 Inhibido.
Enterococcus duransMKTA 10541 Bueno, Colonias rosas-granates,
pequeñas.
Enterococcus faecalis MKTA 29212 Bueno, Colonias rosas-granates,
pequeñas.
Enterococcus faecalis
Materiales
Mechero
Vasos de precipitado (agua destilada estéril, agua
muestra, alcohol)
Embudo
Probeta 100 ml
Pipeta Pasteur
Matraz Kitasato
Alcohol
Agua Destilada Estéril
Placa Petri estéril
Pinzas
Mechero Bunsen
Filtro reticulado
Placa Petri con cultivo Slanetz-Bartley
Procedimiento
1. Preparamos el lugar de trabajo montando el matraz
kitasato con sus partes y el aparato de vacío. También encendemos el mechero
bunsen ya que necesitamos condiciones de esterilidad
2. Teniendo el agua muestra ya preparada, preparamos
en un vaso de precipitado alcohol para cuando tengamos que flamear las pinzas y
en la placa Petri estéril ponemos agua destilada estéril para dejar el filtro
que vamos a usar y que se despegue la parte sobrante
3. Para coger el filtro flameamos primero las pinzas
con cuidado, cogemos le filtro y lo pasamos a la placa Petri con el agua
estéril. Seguidamente cerramos la placa Petri hasta que se despegue bien el
trozo sobrante del filtro.
4. Volvemos a esterilizar las pinzas y cogemos el
filtro
5. De forma rápida pero eficaz vamos a poner el filtro
encima del Kitasato y cerramos con el embudo para filtrar, ponemos las pinzas
de seguridad para que no se vaya a caer el embudo y hacer mejor la filtración.
6. Encendemos la bomba de vacío, el agua irá pasando
por el filtro, en este paso asegurarnos que todo el aparato de filtrado está
bien apretado sino la aspiración será escasa y tardará más
7. Al terminar retirar pinzas de sujeción, embudo y
coger el filtro con las pinzas (previamente esterilizadas flameándolas)
8. Se deja el filtro en la placa Petri del medio agar
Slanetz-Bartley con cuidado de no hacer burbujas entre el medio y el filtro
9. Rotular la placa con los datos necesarios sobre el
recuento que se está realizando, fecha y persona.
10. Por último guardar el cultivo boca abajo y a una
temperatura de 44ºC durante 18-24 horas
Medidas de prevención
Cuidado al flamear con que caiga algo del alcohol
sobre el papel filtrante sobre el que trabajamos
Cuando se manipule la muestra usar guantes para evitar
contagios, pero cuando se está con el fuego se debe quitar el guante con el que
se está manipulando ya que entorpece y puede llevar a errores
Resultados
Salieron menos de 30 colonias por lo que serían
incontables (Salieron 8 colonias)
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