Día 15 - Tomamos provisiones, preparando MacFarland

Preparación escala de McFarland

 

Sesión 5                   Práctica 7

¡Volvemos al espectrofotómetro! Esta vez para ponernos con la escala de McFarland, es una práctica algo complicada porque es larga y uno varias técnicas por lo que empezaremos solo con la preparación de los tubos y más adelante seguiré con los resultados de McFarland (se acerca una recta de calibrado, cuidado), bien ¡A por la bata!

Objetivos

Preparar los tubos de McFarland para realizar más adelante su medición de absorbancia

Fundamento

Como referencia en suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectrofotómetros.

Los estándares pueden ser visualmente comparados con suspensiones de bacterias en salina estéril o en caldos. Si la suspensión es demasiado turbia, puede añadirse diluyente, y si no es lo suficiente turbia, se puede agregar más bacterias. La ventaja es que no es necesario incubar ni usar equipo especial para estimar el número de bacterias

Materiales

Tubos de ensayo con tapón

Pipetas 10ml 

Micropipeta

Espectrofotómetro con sus respectivas cubetas

Agua estéril

Reactivos

H2SO4 0,36M

BaCl2 0,048M

Procedimiento

1. Hacemos el H2SO4 y BCl2 si no los tenemos preparados ya, los preparamos con las técnicas que ya conocemos de todos los anteriores post. O por Vi · Ci = Vf · Cf o sacando sabiendo su molaridad los gramos si es sólido.

2. Una vez realizado los dos reactivos que nos harán poder tener en tubos seriados nuestra escala, seguimos la tabla para ir realizando cada tubo con las medidas correspondientes

3. Cada uno de los tubos va a tener siempre un volumen final de 10ml, por lo que la suma de los dos reactivos siempre dará 10ml, vamos preparando cada uno de los tubos. Por ejemplo, al hacer el tubo 1 vamos a coger 0,1 de BaCl2 y 9,9 de H2SO4

4.Se puede preparar también un tubo 0,5 donde sería la mitad del tubo 1, pero siendo igualmente 10ml. 0,05 de BaCl2 y 9,95 de H2SO4

5. En la preparación de los tubos podemos usar una pipeta de 10ml para introducir el H2SO4, pero si queremos, para facilitar introducir en cada tubo después el BaCl2 podemos utilizar una micropipeta ya que son cantidades muy pequeñas y ésta nos puede facilitar bastante el trabajo

 

6. Cada vez que se realice un tubo, importante rotularlo para no caer en error después, ya que las concentraciones y la turbidez que tiene cada uno es creciente, por lo que equivocarnos en el número de tubo luego nos daría absorbancia distintas que provocarían errores en la recta de calibrado

7. Dejamos los tubos preparados ya guardados para el momento de realizar la medición de absorbancia que será en otra práctica. 

Medidas de prevención

Si tenemos que realizar el reactivo de H2SO4 hacerlo bajo campana ya que se trata de un ácido y puede darnos problemas

Resultados

Los resultados de absorbancia los pondré en el post de “Medición de la absorbancia Escala MacFarland”