Siembra de agua peptonada y su lectura de turbidez
Sesión 11
Práctica 13
Practica sencilla, solo tenemos que sembrar agua
peptonada para poder después con el crecimiento de microorganismos medir su
absorbancia y poder hallar su UFC ¡A por la bata!
Objetivos
Siembra de agua peptonada
Recuento de UFC mediante su absorbancia y escala de
MacFarland
Fundamento
Agua peptonada
Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado
para ser utilizado en lugar de solución fisiológica para recuperar células de
enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos
Composición:
-Peptona de carne (Nutrientes para las
bacterias)
-Cloruro sódico (Se usa para la
resistencia o tolerancia salina de la bacterias y mantener el balance osmótico)
Incubación: Aeróbica, a 35-37 ºC durante 18-24 horas.
Se suele usar contando con un control negativo sin
inocular bacterias como referencia.
Color: ámbar claro
Útil para:
Escherichia
coli ATCC 25922 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853 Bueno
Materiales
Tubos con agua peptonada (Según queramos sembrar)
Tubo con agua muestra
Asa de siembra
Mechero bunsen
Vasos de precipitado
Agua destilada
Mechero
Gradilla
Procedimiento
1. Montamos el lugar de trabajo en condiciones de
esterilidad para poder comenzar con la siembra.
2. Cogemos el tubo que vayamos a sembrar con la mano
no dominante. Con la mano dominante cogemos el asa de siembra, esterilizamos la
punta hasta llevar a rojo vivo
3. El tubo con agua peptonada lo abrimos,
esterilizamos la boquilla y dejamos el tapón agarrado con el dedo meñique de la
mano no dominante, cogemos con el asa de siembra del agua de muestra (o
cultivos anteriores que queramos coger el inóculo) y lo introducimos en el agua
peptonada
4. Movemos el asa de siembra en el interior para que
se desprenda el inóculo
5. Sacamos el asa de siembra, volvemos a esterilizar y
la dejamos, volvemos a esterilizar la boquilla del tubo de agua peptonada,
cerramos y dejamos rotulando siempre de que se trata, cuándo se ha hecho y
quién lo ha hecho.
6. Repetimos mismo proceso con todos los tubos de agua
peptonada que queramos sembrar y metemos en gradilla al final en la estufa a
37ºC 24 horas
7. Al día siguiente el agua presentará turbidez,
cogemos un tubo de agua peptonada sin sembrar para contraste y lo metemos al
espectrofotómetro a 550nm y en la celda del blanco (antes habremos calibrado el
espectrofotómetro)
8. Teniendo el blanco de agua peptonada echa, metemos
el tubo de agua peptonada sembrado y apuntamos su absorbancia
9. Teniendo la absorbancia del tubo de agua peptonada
sembrada, solo tenemos que coger ese dato y cambiarlo por la Y en la anterior
recta de calibrado que hemos realizado. Sabiendo la absorbancia, la a y la b
podemos hallar perfectamente la X que en este caso será la UFC
Medidas de prevención
Cuando estamos con elementos de turbidez siempre
agitar o remover el medio que se va a medir o trabajar, ya que en estos casos
la concentración es muy importante que sea igual en todos los sitios para
evitar errores
Cálculos
La abosrbancia del tubo muestra es de 0,640 por lo que
el cáculo que debemos hacer es de:
0,660= 0,0461 + 0,069X
Despejamos la x y nos da à 8,89·10(elevado a 8)
Resultados
El resultado es de 8,89·10(elevado a 8) UFC/ml
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